ʻO ka chromatography wai ke ʻano nui no ka hoʻāʻo ʻana i ka ʻike o kēlā me kēia ʻāpana a me nā haumia i loko o nā mea maka, waena, hoʻomākaukau a me nā mea hoʻopihapiha, akā nui nā mea ʻaʻole i nā ala maʻamau e hilinaʻi ai, no laila ʻaʻole hiki ke hoʻomohala i nā ʻano hou. I ka hoʻomohala ʻana i nā ʻano hana wai, ʻo ke kolamu chromatographic ke kumu o ka chromatography wai, no laila pehea e koho ai i kahi kolamu chromatographic kūpono. Ma kēia ʻatikala, e wehewehe ka mea kākau i ke koho ʻana i ke kolamu chromatography wai mai ʻekolu ʻaoʻao: nā manaʻo holoʻokoʻa, nā noʻonoʻo a me ka laulā noi.
A. Nā manaʻo holoʻokoʻa no ke koho ʻana i nā kolamu chromatography wai
1. E noʻonoʻo i nā waiwai kino a me nā kemika o ka analyte: e like me ke ʻano kemika, solubility, kūpaʻa (e like me ka maʻalahi o ka oxidized / hoʻemi / hydrolyzed), acidity a me ka alkalinity, etc. kumu i ka hoʻoholo 'ana i nā waiwai, e like me ka hui conjugated i ikaika ultraviolet absorption a me ka ikaika fluorescence;
2. E hoʻoholo i ke kumu o ka hoʻopaʻa ʻana: inā he kiʻekiʻe ka hoʻokaʻawale ʻana, kiʻekiʻe kolamu kūpono, pōkole manawa loiloi, kiʻekiʻe sensitivity, kiʻekiʻe puʻe kū'ē, lōʻihi kolamu ola, haʻahaʻa kumu kūʻai, etc.
- E koho i kahi kolamu chromatographic kūpono: e hoʻomaopopo i ka haku mele ʻana, nā waiwai kino a me nā waiwai kemika o ka mea hoʻopihapiha chromatographic, e like me ka nui o ka particle, ka nui o ka pore, ka ʻae ʻana i ka mahana, ka ʻae pH, adsorption o ka analyte, etc.
- Manaʻo no ke koho ʻana i nā kolamu chromatography wai
E kūkākūkā kēia mokuna i nā mea e noʻonoʻo ʻia i ke koho ʻana i ke kolamu chromatography mai ke kuanaʻike ʻana i nā waiwai kino a me nā waiwai kemika o ke kolamu chromatography ponoʻī. 2.1 Hoʻopiha piha
2.1.1 Silica gel matrix ʻO ka pahu hoʻopihapiha o ka hapa nui o nā kolamu chromatography wai he silica gel. ʻO kēia ʻano mea hoʻopihapiha he maʻemaʻe kiʻekiʻe, haʻahaʻa haʻahaʻa, ikaika mechanical kiʻekiʻe, a maʻalahi hoʻi e hoʻololi i nā hui (e like me ka phenyl bonding, amino bonding, cyano bonding, etc.), akā ʻo ka pH waiwai a me ka pae wela e ʻae ʻia: ʻO ka pae pH o ka hapa nui o ka silica gel matrix fillers he 2 a 8, akā ʻo ka pae pH o nā ʻāpana paʻa silica gel i hoʻololi ʻia e hiki ke ākea e like me ka 1.5 a hiki i ka 10, a aia nō hoʻi nā ʻāpana silica gel i hoʻololi ʻia i paʻa i ka pH haʻahaʻa, e like me Agilent ZORBAX RRHD stablebond-C18, ka mea paʻa i ka pH 1 a hiki i ka 8; ʻO ka palena wela kiʻekiʻe o ka silica gel matrix he 60 ℃, a hiki i kekahi mau kolamu chromatography ke ʻae i ka mahana o 40 ℃ ma ka pH kiʻekiʻe.
2.1.2 Polymer matrix ʻO nā mea hoʻopiha polimer ka hapa nui o ka polystyrene-divinylbenzene a i ʻole polymethacrylate. ʻO kā lākou mau mea maikaʻi, hiki iā lākou ke ʻae i kahi ākea pH ākea - hiki ke hoʻohana ʻia ma ka laulā o 1 a hiki i 14, a ʻoi aku ka pale ʻana i nā wela kiʻekiʻe (hiki ke piʻi ma luna o 80 °C). Ke hoʻohālikelike ʻia me ka silica-based C18 fillers, ʻoi aku ka ikaika o kēia ʻano hoʻopihapiha hydrophobicity, a ʻoi aku ka maikaʻi o ka polymer macroporous i ka hoʻokaʻawale ʻana i nā laʻana e like me nā protein. ʻO kona mau hemahema ʻo ia ka haʻahaʻa o ke kolamu a ʻoi aku ka nāwaliwali o ka ikaika mechanical ma mua o nā mea hoʻopiha silica. 2.2 ʻAno ʻāpana
ʻO ka hapa nui o nā mea hoʻopiha HPLC hou he mau ʻāpana spherical, akā i kekahi manawa he mau ʻāpana like ʻole lākou. Hiki i nā ʻāpana spherical ke hāʻawi i ke kaomi kolamu haʻahaʻa, ʻoi aku ka maikaʻi o ke kolamu kiʻekiʻe, kūpaʻa a me ke ola lōʻihi; i ka wā e hoʻohana ai i nā ʻāpana kelepona kiʻekiʻe-viscosity (e like me ka phosphoric acid) a i ʻole i ka wā ʻeleʻele ka hāpana hāpana, ʻoi aku ka nui o nā ʻāpana irregular i kahi ākea kikoʻī kikoʻī, ʻoi aku ka maikaʻi o ka hana piha o nā pae ʻelua, a ʻoi aku ka haʻahaʻa o ke kumukūʻai. 2.3 Ka nui o ka ʻāpana
ʻOi aku ka liʻiliʻi o ka nui o ka ʻāpana, ʻoi aku ka kiʻekiʻe o ka hana kolamu a ʻoi aku ka kiʻekiʻe o ka hoʻokaʻawale ʻana, akā ʻoi aku ka maikaʻi o ke kūpaʻa kiʻekiʻe. ʻO ke kolamu i hoʻohana pinepine ʻia, ʻo ia ke kolamu nui 5 μm; inā kiʻekiʻe ka koi hoʻokaʻawale, hiki ke koho ʻia kahi mea hoʻopihapiha 1.5-3 μm, kahi kūpono i ka hoʻoponopono ʻana i ka pilikia hoʻokaʻawale o kekahi matrix paʻakikī a me nā mea hoʻohālike he nui. Hiki i ka UPLC ke hoʻohana i nā mea hoʻopihapiha 1.5 μm; Hoʻohana pinepine ʻia ka 10 μm a i ʻole ka nui o nā mea hoʻopihapiha nui no nā kolamu semi-preparative a preparative paha. 2.4 ʻAno kalapona
ʻO ka maʻiʻo kalapona e pili ana i ka māhele o ka pae i hoʻopaʻa ʻia ma ka ʻili o ka silica gel, e pili ana i ka ʻāpana ʻili kikoʻī a me ka uhi ʻana o ka pae paʻa. Hāʻawi ka ʻike kalapona kiʻekiʻe i ka hiki ke kolamu kiʻekiʻe a me ka hoʻonā kiʻekiʻe, a hoʻohana pinepine ʻia no nā laʻana paʻakikī e koi ana i ke kaʻawale kiʻekiʻe, akā ma muli o ka lōʻihi o ka launa ʻana ma waena o nā pae ʻelua, lōʻihi ka manawa loiloi; ʻOi aku ka pōkole o nā kolamu kalapona maʻiʻo chromatographic a hiki ke hōʻike i nā koho like ʻole, a hoʻohana pinepine ʻia no nā laʻana maʻalahi e koi ana i ka nānā wikiwiki ʻana a me nā laʻana e pono ai ke kūlana aqueous phase kiʻekiʻe. ʻO ka maʻamau, ʻo ka ʻike kalapona o C18 mai 7% a 19%. 2.5 Ka nui o ka pore a me ka ʻili kiko
HPLC adsorption media he porous particles, a ka hapanui o ka launa pū ana i loko o ka pores. No laila, pono e komo nā molekala i nā pores e hoʻopili ʻia a hoʻokaʻawale ʻia.
ʻO ka nui o ka pore a me ka ʻāpana kikoʻī he ʻelua mau manaʻo hoʻohui. ʻO ka nui o ka pore liʻiliʻi ʻo ia ka nui o ka ʻili kikoʻī, a ʻo ia hoʻi. Hiki ke hoʻonui i ka pilina ma waena o nā molekele hoʻohālike a me nā pae i hoʻopaʻa ʻia, hoʻonui i ka paʻa ʻana, hoʻonui i ka hoʻouka ʻana a me ke kolamu, a me ka hoʻokaʻawale ʻana i nā mea paʻakikī. No kēia ʻano mea hoʻopihapiha piha nā mea hoʻopiha porous. No ka poʻe me nā koi hoʻokaʻawale kiʻekiʻe, ua ʻōlelo ʻia e koho i nā mea hoʻopihapiha me kahi ākea kikoʻī nui; hiki ke ho'ēmi i ka puʻe hope, hoʻomaikaʻi i ka pono o ke kolamu, a hoʻemi i ka manawa kaulike, kūpono ia no ka nānā ʻana i ka gradient. No kēia ʻano mea hoʻopihapiha nā mea hoʻopiha ʻōhua kumu. Ma ke kumu o ka hōʻoia ʻana i ka hoʻokaʻawale ʻana, ua ʻōlelo ʻia e koho i nā mea hoʻopihapiha me nā wahi liʻiliʻi liʻiliʻi liʻiliʻi no ka poʻe me nā koi pono loiloi kiʻekiʻe. 2.6 Pore volume a me ka ikaika mechanical
ʻO ka pore volume, ʻike ʻia hoʻi ʻo "pore volume", pili i ka nui o ka leo void no kēlā me kēia ʻāpana. Hiki iā ia ke hōʻike maikaʻi i ka ikaika mechanical o ka mea hoʻopihapiha. ʻOi aku ka nāwaliwali o ka ikaika mechanical o nā mea hoʻopihapiha me ka nui pore nui ma mua o nā mea hoʻopihapiha me ka pore volume liʻiliʻi. Hoʻohana nui ʻia nā mea hoʻopihapiha me ka pore volume ma mua o 1.5 mL/g no ka hoʻokaʻawale ʻana o HPLC, aʻo nā mea hoʻopihapiha me ka nui o ka pore ma mua o 1.5 mL/g e hoʻohana nui ʻia no ka molecular exclusion chromatography a me ka haʻahaʻa haʻahaʻa chromatography. 2.7 Ka helu hoʻopaʻa ʻana
Hiki i ka capping ke hoʻemi i nā piko huelo ma muli o ka pilina ma waena o nā pūhui a me nā pūʻulu silanol i hōʻike ʻia (e like me ka hoʻopaʻa ʻana ionic ma waena o nā pūhui alkaline a me nā pūʻulu silanol, nā kaha van der Waals a me nā paʻa hydrogen ma waena o nā pūhui acidic a me nā pūʻulu silanol), a laila e hoʻomaikaʻi ai i ka pono o ke kolamu a me ke ʻano kiʻekiʻe. . ʻO nā ʻāpana hoʻopaʻa ʻole i hoʻopaʻa ʻia e hana i nā koho like ʻole e pili ana i nā pae i hoʻopaʻa ʻia i hoʻopaʻa ʻia, ʻoi aku no nā laʻana polar.
- Ka laulā noi o nā kolamu chromatography wai like ʻole
E wehewehe ana kēia mokuna i ka laulā hoʻohana o nā ʻano kolamu chromatography wai ma o kekahi mau hihia.
3.1 He kolamu chromatographic C18 ma ka hana hoohuli
ʻO ke kolamu C18 ka kolamu hoʻohuli maʻamau i hoʻohana ʻia, hiki ke hoʻokō i nā ʻike a me nā hoʻāʻo haumia o ka hapa nui o nā mea olaola, a pili i nā mea polar medium, polar nāwaliwali a me nā mea polar ʻole. Pono e koho ʻia ke ʻano a me ka kikoʻī o ka kolamu chromatographic C18 e like me nā koi hoʻokaʻawale kikoʻī. No ka laʻana, no nā mea me nā koi hoʻokaʻawale kiʻekiʻe, hoʻohana pinepine ʻia nā kikoʻī 5 μm * 4.6 mm * 250 mm; no nā mea me nā matrices hoʻokaʻawale paʻakikī a me ka polarity like, hiki ke hoʻohana ʻia nā kikoʻī 4 μm * 4.6 mm * 250 mm a i ʻole nā mea liʻiliʻi liʻiliʻi. No ka laʻana, ua hoʻohana ka mea kākau i kahi kolamu 3 μm * 4.6 mm * 250 mm e ʻike ai i ʻelua mau mea haumia genotoxic i celecoxib API. Hiki i ka hoʻokaʻawale ʻana o nā mea ʻelua ke hiki i ka 2.9, kahi maikaʻi loa. Eia kekahi, ma lalo o ka manaʻo o ka hoʻokaʻawale ʻana, inā makemake ʻia ka nānā wikiwiki ʻana, koho pinepine ʻia kahi kolamu pōkole o 10 mm a i ʻole 15 mm. No ka laʻana, i ka wā i hoʻohana ai ka mea kākau i ka LC-MS/MS e ʻike i kahi haumia genotoxic i ka piperaquine phosphate API, ua hoʻohana ʻia kahi kolamu 3 μm * 2.1 mm * 100 mm. ʻO ka hoʻokaʻawale ʻana ma waena o ka haumia a me ka mea nui he 2.0, a hiki ke hoʻopau ʻia ka ʻike ʻana o kahi laʻana i 5 mau minuke. 3.2 He kolamu phenyl ma hope
ʻO ke kolamu Phenyl kekahi ʻano o ke kolamu hoʻohuli. Loaʻa i kēia ʻano kolamu ke koho ikaika no nā pūhui ʻala. Inā nāwaliwali ka pane o nā pūhui ʻala i ana ʻia e ke kolamu C18 maʻamau, hiki iā ʻoe ke noʻonoʻo e hoʻololi i ke kolamu phenyl. No ka laʻana, i ka wā aʻu e hana nei i ka celecoxib API, ʻo ka pane ʻāpana nui i ana ʻia e ke kolamu phenyl o ka mea hana like a me ka kikoʻī like (5 μm * 4.6 mm * 250 mm āpau) ma kahi o 7 mau manawa o ka kolamu C18. 3.3 kolamu pae maʻamau
Ma ke ʻano he kumu hoʻohui kūpono i ke kolamu hoʻohuli ʻia, kūpono ke kolamu maʻamau no nā pūhui polar loa. Inā ʻoi aku ka wikiwiki o ka piko i ka wā e hoʻoheheʻe ʻia me ka ʻoi aku o ka 90% aqueous phase i ke kolamu hoʻohuli ʻia, a kokoke a uhi ʻia me ka piko solvent, hiki iā ʻoe ke noʻonoʻo e hoʻololi i ke kolamu maʻamau. Aia kēia ʻano kolamu i ke kolamu hilic, kolamu amino, kolamu cyano, etc.
3.3.1 Koluma Hilic Hoʻokomo pinepine ke kolamu hilic i nā pūʻulu hydrophilic i loko o ke kaulahao alkyl i hoʻopaʻa ʻia e hoʻonui ai i ka pane ʻana i nā mea polar. He kūpono kēia ʻano kolamu no ka nānā ʻana i nā mea kō. Ua hoʻohana ka mea kākau i kēia ʻano kolamu i ka wā e hana ai i ka ʻike a me nā mea pili o xylose a me nā mea i loaʻa. Hiki ke hoʻokaʻawale maikaʻi ʻia nā isomers o kahi derivative xylose;
3.3.2 Koluma Amino a me ke kolamu cyano E pili ana ke kolamu Amino a me ke kolamu cyano i ka hoʻokomo ʻana i nā hoʻololi amino a me ka cyano ma ka hope o ke kaulahao alkyl i hoʻopaʻa ʻia, i mea e hoʻomaikaʻi ai i ke koho no nā mea kūikawā: no ka laʻana, he koho maikaʻi ke kolamu amino. no ka hoʻokaʻawale ʻana i nā kō, nā amino acids, nā kumu, a me nā amides; ʻoi aku ka maikaʻi o ke koho ʻana o ke kolamu cyano i ka wā e hoʻokaʻawale ai i nā mea like me ka hydrogenated a me ka unhydrogenated ma muli o ke alo o nā mea paʻa conjugated. Hiki ke hoʻololi pinepine ʻia ke kolamu amino a me ke kolamu cyano ma waena o ke kolamu maʻamau a me ke kolamu hope, akā ʻaʻole ʻōlelo ʻia ka hoʻololi pinepine ʻana. 3.4 kolamu kiral
ʻO ke kolamu Chiral, e like me ka inoa i hōʻike ʻia, he kūpono ia no ka hoʻokaʻawale ʻana a me ka nānā ʻana o nā pūhui chiral, ʻoi aku hoʻi ma ke kahua o nā lāʻau lapaʻau. Hiki ke noʻonoʻo ʻia kēia ʻano kolamu i ka wā ʻaʻole hiki i nā kolamu hoʻohuli maʻamau a me nā kolamu maʻamau ka hoʻokaʻawale ʻana o nā isomers. No ka laʻana, ua hoʻohana ka mea kākau i kahi kolamu chiral 5 μm * 4.6 mm * 250 mm e hoʻokaʻawale i nā isomers ʻelua o 1,2-diphenylethylenediamine: (1S, 2S) -1, 2-diphenylethylenediamine a me (1R, 2R) -1, 2 -diphenylethylenediamine, a hiki i ka hoʻokaʻawale ʻana ma waena o nā mea ʻelua ma kahi o 2.0. Eia naʻe, ʻoi aku ke kumukūʻai o nā kolamu chiral ma mua o nā ʻano kolamu ʻē aʻe, maʻamau 1W+/piece. Inā he pono no ia mau kolamu, pono ka hui e hana i kahi kālā kūpono. 3.5 kolamu hoʻololi Ion
He kūpono nā kolamu hoʻololi Ion no ka hoʻokaʻawale ʻana a me ka nānā ʻana o nā ion i hoʻopaʻa ʻia, e like me nā ion, protein, nucleic acid, a me kekahi mau mea kō. Wahi a ke ʻano hoʻopihapiha, ua māhele ʻia lākou i nā kolamu hoʻololi cation, nā kolamu hoʻololi anion, a me nā kolamu hoʻololi cation ikaika.
Hoʻokomo ʻia nā kolamu hoʻololi Cation i nā kolamu i hoʻokumu ʻia i ka calcium a me ka hydrogen-based, i kūpono no ka nānā ʻana i nā mea cationic e like me nā waikawa amino. No ka laʻana, ua hoʻohana ka mea kākau i nā kolamu i hoʻokumu ʻia i ka calcium i ka wā e nānā ana i ka calcium gluconate a me ka calcium acetate i loko o kahi hoʻonā wai. Ua loaʻa i nā mea ʻelua nā pane ikaika ma λ=210nm, a ua hiki ke degere kaʻawale i 3.0; ua hoʻohana ka mea kākau i nā kolamu i hoʻokumu ʻia i ka hydrogen i ka wā e nānā ana i nā mea pili i ka glucose. Nui nā mea pili nui - maltose, maltotriose a me ka fructose - he kiʻekiʻe ka naʻau ma lalo o nā mea ʻike ʻokoʻa, me ka palena ʻike ma lalo o 0.5 ppm a me kahi degere kaʻawale o 2.0-2.5.
ʻO nā kolamu hoʻololi Anion ka mea kūpono no ka nānā ʻana i nā mea anionic e like me nā waikawa organik a me nā ion halogen; ʻO nā kolamu hoʻololi cation ikaika i ʻoi aku ka nui o ka hiki ke hoʻololi i ka ion a me ke koho, a kūpono no ka hoʻokaʻawale ʻana a me ka nānā ʻana i nā laʻana paʻakikī.
ʻO ka mea ma luna nei he hoʻolauna wale i nā ʻano a me nā pae hoʻohana ʻana o kekahi mau kolamu wai chromatography maʻamau i hui pū ʻia me ka ʻike ponoʻī o ka mea kākau. Aia kekahi ʻano kūikawā o nā kolamu chromatographic i nā noi maoli, e like me nā kolamu chromatographic nui-pore, kolamu chromatographic pore liʻiliʻi, kolamu affinity chromatography, kolamu chromatography multimode, kolamu chromatography wai ultra-high performance (UHPLC), kolamu chromatography wai supercritical ( SFC), etc. He kuleana koʻikoʻi ko lākou ma nā kahua like ʻole. Pono e koho ʻia ke ʻano kikoʻī o ke kolamu chromatographic e like me ke ʻano a me nā waiwai o ka hāpana, nā koi hoʻokaʻawale a me nā kumu ʻē aʻe.
Ka manawa hoʻouna: Iune-14-2024